凋亡在金纳米棒(Au-NRs)光热抗肿瘤过程中起重要作用,但其机制并不清楚。我们前期研究发现,控制NIR激光的照射参数,EGFR-mAb功能化修饰Au-NRs光热作用可以诱导癌细胞出现较高凋亡率。最近研究表明,上述凋亡过程中出现线粒体损伤及活性氧产量升高。据此推测,线粒体介导的内源性通路的激活可能在Au-NRs光热诱导肿瘤凋亡活动中起重要作用。为此,本研究将构建EGFR-mAb/GNRs光热诱导Hep-2细胞系稳定的凋亡模型,检测关键凋亡基因蛋白,明确EGFR-mAb/GNRs光热诱导Hep-2细胞凋亡的分子机制,为Au-NRs靶向光热治疗肿瘤的进一步研究奠定基础。 主要研究内容： 1.建立稳定的EGFR-mAb /GNRs光热诱导Hep-2细胞的凋亡体系。 2.研究EGFR mRNA基因静默以及联合Au-NRs光热对Hep-2细胞凋亡的影响。 3.通过对Caspase-8、Bid、Cyt-c、Caspase-3、PARP表达的检测,来判断EGFR-mAb /GNRs光热诱导Hep-2细胞的可能凋亡通路。 4.动物实验验证EGFR-mAb /GNRs光热治疗裸鼠Hep-2细胞移植瘤效果。 发现点：较为深入和系统地揭示了EGFRmAb功能化修饰金纳米棒光热作用诱导喉鳞癌细胞凋亡的分子机制。EGFRmAb/AuNRs靶向聚集Hep-2细胞膜,在EGFR的介导下,AuNRs通过胞吞的方式大量进入细胞内,并集聚到线粒体内。线粒体内的AuNRs以及细胞内外的AuNRs在合适功率NIR激光的照射下发生一系列多层次的热损伤,其结果是出现线粒体膜损伤、细胞内ROS和Ca2+升高,Bcl-2/Bax比例下降, 导致Cyt-c释放,最终诱发以线粒体途径为主导的细胞凋亡。体内外实验充分证明了EGFRmAb/AuNRs光热作用靶向治疗喉癌的良好效果,为进一步的临床前实验奠定了基础。