该项目采用分子生物学、形态学、行为学和影像学等多种研究手段对中脑神经干细胞(mesencephalicneuralstemcells，mNSCs)、多巴胺(dopamine，DA)神经元及其联合移植治疗帕金森病(Parkinson’sdisease，PD)进行了系统地、科学地研究。采用基因克隆技术成功从U-251细胞总RNA中克隆出GDNF基因CDS并构建了GDNF基因真核表达载体pEGFPN1-GDNF。应用基因转染技术，成功将重组质粒pEGFPN1-GDNF转入体外培养的mNSCs建立了GDNF基因修饰mNSCs并对其进行了SPIO标记。同时，成功从大鼠胚胎中脑组织中分离出纯度较高的DA神经元。采用立体定向技术，成功建立了PD模型大鼠并将细胞移植入PD大鼠纹状体区。动物行为学实验研究结果表明：与DA神经元、GFP基因修饰mNSCs、GDNF基因修饰mNSCs单纯移植以及GFP基因修饰mNSCs联合DA神经元移植相比，GDNF基因修饰mNSCs联合DA神经元移植更能显著改善PD大鼠的运动障碍。影像学研究结果表明：移植入PD大鼠纹状体内的大多数mNSCs均停留于移植原位，并未向周围脑组织迁移。形态学研究结果显示：与单纯移植的GFP基因修饰mNSCs、GDNF基因修饰mNSCs以及与DA神经元联合移植的GFP基因修饰mNSCs相比，与DA神经元联合移植的GDNF基因修饰mNSCs更易于在体内存活并分化为DA神经元。此外，该研究还显示移植细胞可诱导内源性NSCs向细胞移植区迁移。该研究最终取得如下结论：1．首次发现GDNF基因修饰mNSCs联合DA神经元移植较DA神经元、GFP基因修饰mNSCs、GDNF基因修饰mNSCs单纯移植及GFP基因修饰mNSCs联合DA神经元移植更具治疗PD的潜力；2．首次发现GDNF基因修饰mNSCs联合DA神经元移植可能通过改变局部微环境，激活内源性神经干细胞，并促使其向损伤区迁移、分化从而发挥其治疗作用。