摘要:
本课题组在实时定量PCR检测技术方面探索建立了改良SYBR greenⅠ法。此外在对国内、澳大利亚及欧洲的Taq-Man探针法进行了实验综合比较,选择探索了欧洲抗癌协会推荐的定量标准化方案并形成了我们的检测方法。实验结果显示:上述方法应用效果良好,结果稳定可靠,其中改良的SYBR greenⅠRQ-PCR方法经济、简便,更适合对目的基因的初步筛查及研究;Taq-Man探针法使结果更加稳定、可靠,可提供更全面准确的诊断信息。 本课题组于2004年较早在国内开展实时定量PCR检测技术的研究及应用,改良SYBR greenⅠ法在国内具有创新性,Taq-Man探针法达国际先进水平,能对多种恶性血液病的基因重排进行检测,范围涉及急、慢性白血病、淋巴瘤、骨髓增殖症等,为恶性血液病的诊断及研究提供了先进、成熟的实验方法。应用该技术对影响恶性血液病发生发展的多个相关基因进行了研究及检测,对探讨药物作用机制、筛选靶向抗肿瘤药物提供了分子生物学实验依据(Mcl-1、survivin基因)。为监测白血病转归提供了临床实用的指标(WT1)和方法。该项目成果的广泛应用,将从分子生物学水平提高恶性血液病的诊疗水平。