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三七总甙单体成分Rg1、Rb1抗肝纤维化的实验研究

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资源类型:
机构: [1]昆明医学院第一附属医院 [2]昆明医学院

获奖: 省自然科学奖·三等奖 获奖时间:2009

关键词: 肝纤维化 三七总甙 线粒体 人参皂苷

摘要:
肝纤维化是慢性肝病发展为肝硬化的中间环节,是发展为肝硬化的基础和必要阶段。阻断肝纤维化的形成和发展对于防治肝硬化具有重要的意义。药物尤其是中药将会是今后肝纤维化治疗的最主要的措施。提取中药的单体成分,从细胞、分子水平研究这些单体抗肝纤维化作用的确切机制,将是以后抗肝纤维化研究的主要方向。本课题对中药三七的主要单体成分Rg1、Rb1抗肝纤维化的作用进行研究。本课题采用CCl4皮下注射的方法,建立大鼠肝纤维化模型。大鼠随机分组为10组,分别为三七总甙组,Rgl高、中、低剂量组,Rbl高、中、低剂量组、秋水仙碱组、生理盐水组和正常对照组,每组15只。在建模同期,给予三七总甙、三七总甙单体成分人参皂苷Rg1、Rb1皮下注射。5周后造模成功全部处死大鼠,取血、分离、低温保存血清;剖腹取肝,肝脏标本分别置于10%甲醛、3.5%戊二醛、液氮罐并速冻于-750C超低温冰箱待检。治疗前后测定血清肝功能指标(ALT、AST、Tbil、ALP)和肝纤维化血清学指标(HA、PCⅢ、LN)。大鼠肝脏组织进行HE染色、Masson三色染色和银染,进行肝纤维化分期和肝脏炎症活动度分级,在电镜下观察肝脏组织的超微结构变化;半定量RT-PCR检测肝脏组织TIMP-1Mrna、CollagenIMrna的表达。统计学处理:所有的数据用SPSS13.0统计软件包进行处理分析。检验水准:0.05。本实验结果显示,人参皂苷Rg1能明显降低肝纤维化血清PCⅢ、HA、LN水平;病理结果也显示,人参皂苷Rg1能明显改善肝纤维化程度,明显减轻胶原的沉积,与血清PCⅢ、HA、LN水平的改善一致。病理结果还显示,人参皂苷Rg1能明显改善肝脏炎症活动度。另外,Rg1对肝纤维化大鼠的肝功能亦有改善作用,均能不同程度地降低血清ALT、AST、Tbil、ALP水平。通过电镜观察,CCl4诱导的肝纤维化大鼠肝细胞的线粒体发生了明显的改变,其出现扩张,肿胀或固缩,部分线粒体嵴变形扭曲且减少或消失,部分线粒体基质颗粒减少,甚至出现致密的、边界不清的絮状物。线粒体扩张肿胀时,比表面变小,反之固缩时其比表面变大。经治疗后,结合实验中测算肝细胞线粒体的有关参数比较结果分析,Rg1能一定程度的减轻CCl4诱导的肝纤维化大鼠肝细胞脂肪空泡变性程度,减轻线粒体的扩张、肿胀程度,并对胶原纤维的沉积有改善作用,而Rb1不具有抗肝纤维化作用,并具有肝毒性。本研究通过RT-PCR的方法检测肝组织中TIMP-1mRNA和CollagenⅠmRNA的表达。发现Rg1能够明显抑制肝纤维化大鼠肝脏组织中TIMP-1、CollagenⅠmRNA的表达,并且使肝纤维化的组织学分级呈平行降低,提示抑制TIMP-1、CollagenⅠmRNA的表达可能是Rg1发挥抗纤维化的作用机制。

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