目的：了解云南省三级医院2013-2015年血液标本中分离的铜绿假单胞菌的耐药状况，为临床治疗铜绿假单胞菌感染合理使用抗菌药提供依据。方法：选取云南省三级医院2013年1月-2015年12月各临床科室住院和门诊患者所送检的血液标本中分离的铜绿假单胞菌作为研究对象，采用 Whonet 5.6软件对所有血液标本中分离的铜绿假单胞菌进行抗菌药物耐药性统计分析，采用 SPSS 18.0统计学软件对血液标本来源和痰液标本来源的铜绿假单胞菌进行分析。结果：2013-2015年自血液标本中共分离出铜绿假单胞菌415株，铜绿假单胞菌的分离数量分别为115，143，157株。铜绿假单胞菌对氨曲南耐药率最高（31.4%），对阿米卡星的耐药率最低（15.2%），对一线抗假单胞菌的哌拉西林-他唑巴坦耐药率为22.7%。除美罗培南和妥布霉素外，对哌拉西林-他唑巴坦在内的其余抗菌药均呈上升趋势。血液标本来源的铜绿假单胞菌对哌拉西林、头孢吡肟、美罗培南、庆大霉素、阿米卡星的耐药率明显高于痰液标本的耐药率，差异有统计学意义（P＜0.05）。儿童患者来源的菌株对多数抗菌药的耐药率均低于成人患者和老年人患者来源的菌株。结论：2013-2015年云南省三级医院血液标本中铜绿假单胞菌的分离数量逐年增多，对包括一线抗菌药物哌拉西林-他唑巴坦在内的多数常用抗菌药物的耐药率逐年上升，对多种抗菌药物的耐药率较痰液标本来源的菌株高，应加强对血液标本中铜绿假单胞菌耐药率的连续监测以指导临床合理用药。