摘要：
目的 对比低氧培养与常氧条件下低氧模拟剂二甲基乙二酰基甘氨酸(dimethyloxalylglycine,DMOG)对小鼠BMSCs成骨分化的影响.方法 原代分离培养健康3～4周龄昆明小鼠BMSCs,采用流式细胞术对细胞CD29、CD44、CD90、CD34表面标志进行检测,行成骨、成脂、成软骨诱导分化染色鉴定.取第3代BMSCs分为对照组(A组,常氧条件下培养)、低氧培养组(B组,1％O2低氧条件下培养)及DMOG干预组(C组,常氧条件下加入0.5 mmol/L DMOG培养).分别于培养1、2、3、4d采用MTT法检测BMSCs增殖情况,7、14d检测ALP含量,24h后采用Western blot法检测低氧诱导因子lα(hypoxia inducible factor,HIF-1α)蛋白表达,3、7d采用实时荧光定量PCR检测RUNX2、Osterix基因表达,21 d行茜素红染色观察.结果 BMSCs流式细胞术表面标志鉴定示CD29(+)、CD44(+)、CD90(+)、CD34(-);成骨、成脂、成软骨诱导分化后茜素红染色、油红O染色及甲苯胺蓝染色均呈阳性.MTT法检测示,培养1d,3组细胞增殖比较差异无统计学意义(P＞0.05);2、3、4d,与A组比较,C组均抑制细胞增殖,但差异无统计学意义(P＞0.05);而B组则促进细胞增殖,差异有统计学意义(P＜0.05).培养各时间点,B、C组ALP含量、HIF-1α蛋白相对表达量及RUNX2、Osterix基因相对表达量均显著高于A组,ALP含量及RUNX2、Osterix基因相对表达量C组高于B组,而HIF-1α蛋白相对表达量B组高于C组,差异均有统计学意义(P＜0.05).培养21d茜素红染色示,A组可见少许结节状红染物质,B组可见中等量红染物质,而C组可见大量红染物质.结论 低氧能明显促进BMSCs增殖,DMOG对BMSCs增殖无明显影响;低氧与DMOG均能促进BMSCs成骨分化,且DMOG促BMSCs成骨分化能力更强.
