目的：利用人脑微血管内皮细胞（hBMEC）、脑周细胞（PC）和U251胶质瘤细胞（以下简称U251）非接触共培养体外构建稳定的三联血瘤（脑）屏障（BTB/BBB）模型。方法3种细胞传代培养达一定数目，应用 Transwell插槽体外共培养构建BTB/BBB模型，经4 h试漏试验、倒置显微镜等观察形态学改变、免疫荧光技术观察Claudin-5、Occludin表达情况及模型对辣根过氧化物酶（HRP）通透性试验评价模型屏障功能。结果 hBMEC呈现出典型的鹅卵石样外观，非接触共培养后呈单层梭形生长，出现其特有的“漩涡”状，形态呈长梭形；PC外形不规则，具有重叠生长特性；U 251呈典型的肿瘤细胞生长特性。3种不同方法构建的模型液面试漏实验均出现一定液面差；免疫荧光显示hBM EC细胞间形成连续而致密的连接，但强弱不等。3种模型对HRP通透性显示：单纯 hBMEC 为43．490％±3．572％、hBMEC ＋ U251为36．540％±1．475％、hBMEC ＋ PC ＋ U251为26．460％±2．372％，差异有统计学意义（t＝19．330，P＜0．05）。结论 hBM EC＋ PC＋ U251非接触共培养模型的形态结构及屏障功能均比单纯hBM EC和hBM EC＋ U251更优越，具备更完善的BTB/BBB基本特征和功能，为今后体外研究BTB/BBB的功能和调控机制及药物筛选提供一种新型体外模型工具。