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◇ CSCD-C
文章类型：
机构：
[1]昆明医科大学第一附属医院分子心血管病研究室,昆明650032
昆明医科大学附属第一医院
[2]北京军区总医院生物治疗中心,北京100700
出处：
ISSN：
关键词：
TRIP15
蛋白质结晶
基因表达
摘要：
目的:构建人甲状腺激素受体相互作用蛋白15 (thyroid hormone receptor interacting protein 15,TRIP15)的原核表达载体,在大肠杆菌表达并纯化、结晶表达产物;证实TRIP15在人脐静脉内皮细胞株、血小板、二尖瓣、胆囊和胶质瘤存在表达.方法:以人肝细胞cDNA文库为模板,通过PCR扩增TRIP15的全长编码区序列,双酶切后连接到pGEX-6P-1载体上,转化E.coli BL21(DE3)菌株,通过亲和层析及分子筛对表达产物进行纯化,采用气相扩散悬滴法筛选并优化结晶条件,通过X射线晶体衍射技术检测晶体衍射;采用RT-PCR和Western blot研究TRIP15在人脐静脉内皮细胞株、血小板、二尖瓣、胆囊和胶质瘤的表达情况.结果:成功构建了TRIP15的原核表达载体,获得了电泳纯TRIP15蛋白,得到了蛋白质晶体,但衍射能力很弱;通过RT-PCR证实其在人脐静脉内皮细胞株、血小板、二尖瓣、胆囊和胶质瘤存在表达.结论:成功构建了TRIP15的原核表达载体、建立了表达纯化策略并获得了初步结晶的实验条件,为最终解析其三维结构奠定了基础;初步证实TRIP15在人脐静脉内皮细胞株、血小板、二尖瓣、胆囊和胶质瘤存在表达,为相关研究的开展奠定了基础.
基金：
国家自然科学基金(30860278、81160025)；;云南省中青年学术技术带头人后备人才项目(2011CI057)；;云南省应用基础研究重点项目(2012FB005)；;云南省卫生领军人才培养计划(L-201203)资助项目；
第一作者：
第一作者机构：
[1]昆明医科大学第一附属医院分子心血管病研究室,昆明650032
[2]北京军区总医院生物治疗中心,北京100700
通讯作者：
推荐引用方式(GB/T 7714)：
王海波,叶雨佳,孟照辉.人甲状腺激素受体相互作用蛋白15的初步结晶实验及其在人组织表达的研究[J].中国生物工程杂志.2014,34(04):21-26.
