摘要：
目的 观察人视网膜血管内皮细胞(HREC)低氧模型中乙酰肝素酶(Hpa)、血管内皮生长因子( VEGF)和RNA聚合酶-Ⅱ(Pol-Ⅱ)的表达变化,探讨低氧性视网膜新生血管形成中Hpa和VEGF的相关性及可能机制.方法 使用低氧模拟剂氯化钴(CoCl2)造成HREC低氧模型,分为4组,分别为正常对照组、低氧诱导组、磷酸甘露戊糖硫酸盐(PI-88)组和空白对照组.低氧诱导组为含CoCl2 100 μmol/ml的培养液培养48 h;PI 88组为含CoCl2 100 μmol/L和Hpa竞争性抑制剂PI-88 5 μg/ml的培养液干预48 h；空白对照组为等量PBS干预HREC 48 h.免疫荧光染色法观察正常对照组和低氧诱导组HREC中Hpa、VEGF以及PolⅡ的表达.蛋白质免疫印迹(Western blot)检测各组间Hpa和VEGF蛋白表达变化.结果 免疫荧光染色结果显示,低氧诱导组HREC细胞质内Hpa荧光和VEGF荧光均较正常对照组增强；PI-88组细胞质内VEGF荧光较低氧诱导组减弱.低氧诱导组细胞核内Hpa较正常对照组明显增强,且分布与Pol-Ⅱ相吻合.Western blot检测结果显示,与正常对照组比较,低氧诱导组Hpa蛋白和VEGF蛋白表达均明显升高,差异有统计学意义(Hpa:F=-4.005,P＜0.05；VEGF:F=-4.063,P＜0.05)；PI-88组VEGF蛋白表达较低氧诱导组VEGF蛋白表达降低,差异有统计学意义(F=5.963,P＜0.05).结论 低氧诱导的HREC中,Hpa的表达增高,导致VEGF的增加,促进了视网膜新生血管形成.
