摘要：
目的 制备铜绿假单胞菌(PA)主动外排系统外膜蛋白OprM及抗OprM多克隆抗体,为深入研究主动外排系统奠定基础.方法 从PA基因组中克隆oprM基因,构建pET28a-c-OprM表达载体,在大肠埃希菌中经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达并用免疫转印试验(Western blot)验证,建立重组OprM纯化方案,免疫动物制备多克隆抗体.结果 扩增出带有EcoRⅠ和NotⅠ酶切位点及保护碱基的oprM基因序列,构建了pET28a-c-OprM表达载体,诱导表达的重组OprM蛋白为带有His标签的不可溶包涵体,建立并优化了重组OprM的纯化方法,免疫小鼠获得抗OprM蛋白的多克隆抗体.结论 成功制备了OprM蛋白和抗OprM多克隆抗体,为深入研究该蛋白及相关的主动外排系统提供了有效手段.
