我们用5-氟尿嘧啶(5-Fu)、羟基喜树碱(HCPT)在体外诱导人肝癌细胞SMMC-7721 产生凋亡，并用双荧光染料吖啶橙／溴乙锭(AO／EB)染色结合DNA电泳法进行观察，结果报道如下。　　一、材料与方法　　将1×108/L SSC-7721细胞(中国科学院上海细胞学研究所)接种于含体积分数为10%小牛血清的RPMI 1640培养液中，于37 ℃，体积分数5%CO2培养24 h，细胞铺满瓶底，呈对数生长时加入5-Fu、HCPT使二者终浓度分别为75 mg/L、1 mg/L，再继续孵育，分别于6、1 2、24、48 h观察结果。　　细胞孵育至特定时间，以质量分数为0.125%胰酶消化细胞3～5 min，细胞脱壁后加入原培养液洗刷细胞，2 000 r/min离心5 min，弃上清，加入500 μl培养液，配成细胞悬液，再加入实验用AO/EB溶液20 μl，混匀，置1滴于载玻片上，荧光显微镜下观察200个细胞，分别计数早期凋亡细胞(VA)、晚期凋亡(NVA)、活细胞(VN)及非凋亡的死亡细胞(NVN)，计算凋亡率。　　凋亡率＝(VA+NVA)/(VA+NVA+VN+NVN)×100%　　收集细胞，磷酸盐缓冲液洗涤2遍，低速离心5 min后弃上清。加入抽提缓冲液(10 mmol/L Tris-HCl ph 8.0、20 mg/L胰RNA酶、0.5%SDS)，37?℃ 1?h。加入蛋白酶K至终浓度100 mg/L，55?℃ 3?h，每隔20～30 min摇动1次至室温，按酚／氯仿法抽提DNA。1%琼脂糖凝胶电泳，紫外投射仪上观察并摄片。　　二、结果　　5-Fu、HCPT均能诱导SMMC-7721细胞产生凋亡，且随时间延长，其凋亡率在增加，在加药后6、12、24、48 h用AO／EB染色法检测，细胞凋亡率5-Fu组分别为19.6%、 23.8%、35.4%、38.7%，HCPT组分别为21.2%、26.5%、37.1%、42.6% ，而对照组分别为2.0%、2.8%、3.2%、3.5%。两种药物在相同时间诱导SMMC-7721凋亡的百分率差异无显著性(P＞ 0.05 )，而两者诱导细胞凋亡的百分率与对照组比较，差异均有显著性(P＜0.01。DNA电泳显示两种药物诱导6 h后均可见DNA裂解成180～250 bp整数倍的小片段，呈典型的梯形条带，以4 h最为明显，而对照组无此表现。　　三、讨论　　本研究结果显示，SMMC-7721细胞经小剂量5-Fu、HCPT作用后，DNA电泳显示出典型的梯形条带。在琼脂糖凝胶电泳中DNA片段呈梯形表现，是DNA链被裂解成核小体间长度片段的特异性表现。从而提示小剂量的5-Fu、HCPT具有诱导SMMC-7721细胞产生凋亡的作用，可作为细胞凋亡诱导剂用于肝癌治疗。