为了探讨以通用引物应用PCR技术扩增克隆性免疫球蛋白重链基因(IgH)重排的最佳实验条件及SYBRGreen Ⅰ实时定量PCR检测该基因的可行性,以通用引物对克隆性IgH重排进行扩增,对影响PCR扩增的退火温度、引物浓度、Taq酶用量、dNTP浓度、镁离子浓度、循环次数等实验因素进行了系统研究,找出最佳反应参数,并以通用引物进行了SYBR green Ⅰ实时定量PCR对IgH重排基因的检测,测定了该法检测IgH重排基因的敏感性.结果表明:最佳退火温度为60℃,最佳引物浓度为0.8 μmol/L,0.5 U的Taq酶量效果满意,最适dNTP浓度为100μmol/L,最适镁离子浓度为3.0 mmoL/L,最佳循环次数为40次.SYBR Green Ⅰ实时定量PCR可以实现对克隆性IgH重排的扩增和荧光信号的检测分析,其对IgH重排基因检测的敏感性为10 4/ml.结论:确定了应用PCR技术检测克隆性IgH重排的最适反应条件,实现了用通用引物对克隆性IgH重排稳定、特异的扩增,初步实现了以通用引物和应用SYBR Green Ⅰ实时定量PCR对IgH重排的检测.
基金：
云南省教育厅资助项目(05-206(0291))
语种：
中文
第一作者：
第一作者机构：[1]昆明医学院第一附属医院血液科,昆明650032
通讯作者：
通讯机构：[1]昆明医学院第一附属医院血液科,昆明650032[2]昆明市延安医院
推荐引用方式(GB/T 7714)：
李惠民,石岚,段勇,等.IgH重排的实时定量PCR检测及反应参数研究[J].Zhongguo shi yan xue ye xue za zhi / Zhongguo bing li sheng li xue hui = Journal of experimental hematology / Chinese Association of Pathophysiology.2005,13(4):
