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本发明公开了一种特异性多克隆抗体检测COG5的间接ELISA方法，包括以下步骤：使用包被液将COG5重组蛋白进行包被；第二天倒掉板孔内包被液，用PBST洗涤；使用封闭剂对包被后的酶标板进行封闭处理；倒掉封闭液，用PBST洗涤；用PBST将多抗血清倍比稀释，同时设空白对照和阴性对照，温箱孵育；倒掉免疫血清，用PBST洗涤；用PBST将酶标二抗稀释，箱孵育，洗板；加入双组份显色液A，B温浴；加入终止液，终止显色反应；进行双波长OD值检测。该方法测定血清COG5具有良好的检测性能，可初步满足临床需求。
主权项：
1.一种特异性多克隆抗体检测 COG5 的间接ELISA方法，其特征在于，COG5 重组蛋白抗原的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，包括以下步骤： （1）包被∶使用包被液将COG5 重组蛋白，在96孔板上进行 100μl/孔包被； （2）洗板：第二天倒掉板孔内包被液，用PBST洗涤三次，每孔250μl，每次 3-5
分钟，尽量拍干； （3）封闭∶使用封闭剂对包被后的酶标板进行封闭处理，每孔加200μl，条件37 ℃温浴1h； （4）洗板：倒掉板孔内封闭液，用PBST洗涤三次，每孔250μl，每次 3-5分钟，尽量拍干； （5）加入一抗免疫血清∶用PBST将多抗血清倍比稀释，同时设空白对照和阴性对照，每孔100 μl，加完后，于37℃温箱孵育1h； （6）洗板：倒掉板孔内免疫血清，用PBST洗涤三次，每孔250μl，每次 3-5分钟，尽量拍干； （7）加酶标二抗∶上述一抗孵育结束并洗涤后，用PBST将酶标二抗稀释为1∶10000稀释度，每孔100 μl，37℃避光温箱孵育1h，洗板； （8）加入双组份显色液A，B每孔各50μl，置于恒温水浴箱中，全程避光操作，37℃温浴1-15min； （9）终止液每孔加100 μl，终止显色反应； （10）用Thermo酶标仪在450-630nm进行双波长OD值检测。
