目的 了解某院尿培养病原菌的分布及耐药情况，为治疗尿路感染提供依据。方法 分析云南大学附属医院2015年1月至2019年12月住院患者中段尿培养阳性结果，采用微生物鉴定仪进行菌种鉴定及药敏试验，使用Whonet 5.6软件进行数据分析。结果 共分离出4 974株病原菌，其中革兰阴性菌3 892株（78.2%）,革兰阳性菌1 082株（21.8%）。尿培养病原菌占比前5位分别为大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、屎肠球菌、铜绿假单胞菌、粪肠球菌。男性患者尿培养的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌对大部分抗菌药物的耐药率高于女性（P＜0.05）,女性患者尿培养的铜绿假单胞菌对大部分抗菌药物的耐药率高于男性（P＜0.05）。≥65岁患者尿培养的大肠埃希菌对头孢他啶和环丙沙星的耐药率，以及屎肠球菌对高浓度链霉素耐药率均高于＞14～＜65岁患者尿培养的菌株（P＜0.05）。＞14～＜65岁患者尿培养的肺炎克雷伯菌对头孢他啶、头孢曲松、氨曲南、庆大霉素、环丙沙星、左氧氟沙星的耐药率，铜绿假单胞菌对除头孢他啶以外的抗菌药物耐药率，以及粪肠球菌和屎肠球菌对红霉素和四环素耐药率均高于≥65岁患者尿培养的菌株（P＜0.05）。大肠埃希菌对阿莫西林/克拉维酸、头孢哌酮/舒巴坦的耐药率呈升高趋势（P＜0.05）;肺炎克雷伯菌对青霉素类、阿莫西林/克拉维酸和哌拉西林/三唑巴坦、头孢菌素类、喹诺酮类、氨曲南、庆大霉素、复方磺胺甲噁唑、呋喃妥因耐药率较高（＞40.0%）,对厄他培南的耐药率呈升高趋势（P＜0.05）;铜绿假单胞菌对多数测试抗菌药物耐药率均呈升高趋势（P＜0.05）,尤其在2019年耐药率均较高（≥70.00%）;屎肠球菌和粪肠球菌对抗菌药物的耐药情况较平稳（P＞0.05）。结论 大肠埃希菌和肠球菌仍然是尿路感染的主要病原菌，不同性别、不同年龄患者的病原菌谱和耐药性存在差异，尿培养病原菌中耐药率较高的大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和铜绿假单胞菌应为重点监测对象。