目的分析全国11家三级医院尿标本分离细菌的菌种分布及耐药性。方法应用WHONET 5.6软件对2018—2020年全国11家三级医院尿标本分离细菌药敏结果进行分析。结果男性患者尿标本分离细菌前5位的分别是大肠埃希菌（23.9%～27.4%）、屎肠球菌（12.5%～13.5%）、肺炎克雷伯菌（9.9%～11.5%）、粪肠球菌（8.5%～9.8%）、铜绿假单胞菌（5.2%～6.6%）;女性患者尿标本分离细菌前5位的分别是大肠埃希菌（51.5%～52.8%）、屎肠球菌（9.8%～12.8%）、肺炎克雷伯菌（8.5%～9.2%）、粪肠球菌（5.3%～6.5%）、奇异变形杆菌（3.0%～3.6%）。屎肠球菌对左氧氟沙星、环丙沙星和氨苄西林耐药率均在90%以上,对万古霉素的耐药率为1.2%～1.6%。粪肠球菌对呋喃妥因和氨苄西林的耐药率分别为1.8%～2.4%和3.1%～4.2%,对万古霉素的耐药率从0增加至0.5%。大肠埃希菌ESBL检出率为46.7%～50.4%,对哌拉西林/他唑巴坦的耐药率为3%～3.2%,对碳青霉烯类的耐药率为0.7%～1.6%。肺炎克雷伯菌ESBL检出率为38.7%～50.5%,对碳青霉烯类耐药率从9.2%增加至15.2%。奇异变形杆菌对头孢曲松的耐药率为34%～42.9%,对哌拉西林/他唑巴坦的耐药率为0.2%～1.6%,对美罗培南的耐药率由0增加至0.9%。阴沟肠杆菌对头孢曲松的耐药率为38.9%～50.7%,对哌拉西林/他唑巴坦的耐药率为11.8%～21.2%,3年间对碳青霉烯类耐药率逐年上升,从5.4%上升至22%。铜绿假单胞菌对哌拉西林/他唑巴坦的耐药率为5.5%～14%,对碳青霉烯类耐药率为9%～20.5%。鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类耐药率为35.5%～54%。结论尿标本分离细菌在不同性别构成上有所不同,尿路感染多重耐药菌逐年增加,尤其是碳青霉烯类耐药的革兰阴性菌。应加强医院感染防控和抗菌药物的科学化管理。