摘要：
目的 探讨槲皮素(QR)对敌草快(DQ)中毒致小鼠急性肝损伤的保护作用及其机制.方法 将80 只SPF级健康雄性C57BL/6 小鼠随机分为正常对照组、DQ模型组、QR治疗组和QR对照组,每组 20 只.采用一次性腹膜腔注射 40 mg/kg DQ溶液 1mL的方法建立DQ中毒模型;正常对照组和QR对照组腹膜腔注射等量纯水.制模 4h后,QR治疗组和QR对照组灌胃 50 mg/kg QR溶液 0.5 mL;正常对照组和DQ模型组灌胃等量纯水;均每日 1 次,连续 7d.7d后麻醉小鼠取眼球血,处死后收集肝组织.透射电镜下观察小鼠肝组织结构改变;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)水平;分别采用水溶性四氮唑-1 比色法(WST-1)、硫代巴比妥酸法(TBA)和酶促反应法检测肝组织还原型谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)水平;采用蛋白质免疫印迹试验(Western blotting)检测肝组织核因子E2 相关因子 2(Nrf2)、血红素加氧酶-1(HO-1)、Kelch样ECH相关蛋白 1(Keap1)、活化天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶 9(caspase-9)的蛋白表达.结果 透射电镜下显示,DQ模型组小鼠肝组织线粒体严重损伤,QR治疗组线粒体损伤情况较DQ模型组明显减轻.与正常对照组比较,DQ模型组血清ALT和AST水平及肝组织MDA水平均显著升高,肝组织GSH和SOD水平均显著降低;与DQ模型组比较,QR治疗组血清ALT和AST水平及肝组织MDA水平均显著降低[ALT(U/L):52.60±6.44 比 95.70±8.00,AST(U/L):170.45±19.33 比 251.10±13.09,MDA(nmol/mg):12.63±3.41 比 18.04±3.72],肝组织GSH和SOD水平均显著升高[GSH(μmol/mg):39.49±6.33 比 20.26±3.96,SOD(U/mg):121.40±11.75 比 81.67±10.01],差异均有统计学意义(均P＜0.01).Western blotting检测结果显示,与正常对照组比较,DQ模型组肝组织Nrf2 和HO-1 蛋白表达均显著降低,Keap1 和活化caspase-9 蛋白表达均显著升高;与DQ模型组比较,QR治疗组肝组织Nrf2、HO-1 蛋白表达均显著升高[Nrf2/β-actin:1.17±0.08 比 0.92±0.45,HO-1/β-actin:1.53±0.17 比 0.84±0.09],Keap1和活化caspase-9蛋白表达均显著降低[Keap1/β-actin:0.48±0.06比1.22±0.09,活化caspase-9/β-actin:1.17±0.12 比 1.59±0.30],差异均有统计学意义(均P＜0.01).结论 QR可通过激活Keap1/Nrf2 信号通路减轻DQ中毒所致小鼠急性肝损伤.
