摘要:
异基因造血干细胞移植(Allo- HSCT)是治疗多种造血系统疾病、恶性实体瘤及某些遗传病的重要手段。但供体细胞是否植入、存活及转归,必须经实验检测证明,重要的指标是在受者体内检测到供者源性细胞,课题采用PCR法扩增多位点VNTR, 对Allo- HSCT的植入状态进行扩增片断多态性分析,作为能从基因水平对植入状态进行客观评价的检测指标。在人类基因组中,存在着许多可变串联重复序列(VNTR),不同个体的每个VNTR有着极其相似的核心序列,但在不同个体的等位基因上因串联重复单位和重复次数各不相同,导致DNA等位基因片段长度不同。因此构成了具有良好个体特异性的DNA片段长度多态性。这种良好的个体识别性对于识别异源性细胞的植入有重要的应用意义。课题利用DNA微卫星标志D1S80、P33.6、ApoB′三个位点,用PCR法,借助一对与VNTR位点两侧序列互补的引物,在耐热DNA聚合酶的作用下,对重复的核心序列进行扩增,扩增产物经电泳检测其多态性,用于分析Allo-HSCT后的植入状态。对7例Allo-HSCT供、受者移植前后不同时期的外周血标本、口腔粘膜细胞进行了VNTR多态性识别受者体内细胞源性的分析,结果客观、准确,不血型、性别、HLA配型情况及造血功能低下等因素的影响,适于临床应用。VNTR D1S80、P33.6、ApoB′在人群中具有高度多态性,作为检测植入状态的重要指标,用于分析Allo-HSCT的植入状态,完全嵌合、混合嵌合,未植入、嵌合体的转归,及白血病复发的起源。对于传统方法难以检定的多来源造血干细胞移植的特殊形式的植活状态,该方法都有着重要的应用价值。