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云南个旧肺癌细胞系GLC-82cDNA文库的构建及N35蛋白的编码基因克隆研究

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文献详情

资源类型:
机构: [1] 昆明医学院第一附属医院

获奖: 省科技进步奖·三等奖 获奖时间:2004

关键词: 肺癌 表达文库 蛋白编码 基因克隆 亚细胞结构 肿瘤细胞 单克隆抗体

摘要:
为从基因水平了解云南个旧肺癌发生发展的病变机理,该项目在国家自然科学基金(项目编号:39960078)支持下,进行了云南个旧肺癌细胞相关蛋白特性分析,该糖蛋白分子在亚细胞结构中主要分布于胞核,在肿瘤细胞有丝分裂时明确地定位于中心粒(centriole)结构上,其功能可能与肿瘤细胞无限制增殖密切相关;以云南个旧肺癌细胞YTMLC-90为材料,采用Clontech-SMARTcDNALibrary技术,构建成功YTMLC-90肺癌细胞cDNA表达文库,其未扩增文库的滴度1.06X106pfu/ml,插入cDNA的长度为750-3000bp,属质量较好的cDNA文库;以自行研制的抗人肺癌单克隆抗体为免疫探针,对构建于λ噬菌体的肺癌细胞cDNA文库进行免疫筛选,所获的阳性克隆行DNA序列测定后与GenBank基因数据库进行同源比较,发现与人类蛋白磷酸酶2的催化亚基、α异构体基因高度同源,并在260位点发生C-T碱基的点突变,推演所编码肽链的氨基酸发生了精氨酸-色氨酸的改变。该基因及其编码蛋白有可能成为肺癌的基因诊断和生物治疗新的候选靶抗原和靶基因,是一个新发现的肺癌相关基因。该研究成果扩大了中国的重要疾病相关基因资源,对研究开发可供临床应用的云南高发肺癌新的诊治手段、进一步提高云南肺癌高危人群的早诊率和存活率,具有十分重要的意义。

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