高级检索
当前位置: 首页 > 详情页

大鼠CaSR基因的慢病毒高表达细胞系和RNA干扰质粒的构建及鉴定

Construction and Identification of Lentiviral Highly Expressing Cell Line and RNA Interference Plasmid of Rat CaSR Gene

文献详情

资源类型:

收录情况: ◇ 统计源期刊

机构: [1]昆明医科大学第一附属医院泌尿外一科,云南昆明,650032
出处:
ISSN:

关键词: 钙敏感受体 引物 干扰RNA 质粒

摘要:
目的 构建大鼠CaSR基因的慢病毒高表达细胞系和RNA干扰质粒,为进一步探究RNA干扰技术对CaSR在肾脏对钙重吸收调控中的作用提供基础准备.方法(1)CaSR基因慢病毒高表达细胞系构建:PCR克隆CaSR目的基因,双酶切CaSR基因和pcDNA3.1载体,连接酶连接,阳性克隆筛选后测序,将pcDNA3.1-CaSR高表达载体和空载体(对照组)经慢病毒包装后转染NRK-52E细胞,Western blot测定CaSR蛋白表达;(2)CaSR基因的RNA干扰质粒构建:设计3对靶向干扰CaSR基因的RNA引物序列,双酶切干扰引物和pLV[shRNA]-EGFP载体,然后经T4连接酶连接,获得重组干扰质粒pLV[shRNA]-EGFP-CaSR,转化至感受态E.coli DH5,阳性克隆筛选后测序,测定干扰效率.结果(1)测序结果与CaSR基因序列一致;(2)测序结果与设计shRNA引物序列一致;(3)Western blot检测获得慢病毒高表达稳定细胞系的CaSR蛋白;(4)干扰质粒干扰高表达细胞系有效.结论成功构建大鼠CaSR基因的慢病毒高表达细胞系和RNA干扰质粒.

基金:

基金编号: 2017FE468

语种:
第一作者:
第一作者机构: [1]昆明医科大学第一附属医院泌尿外一科,云南昆明,650032
通讯作者:
推荐引用方式(GB/T 7714):

资源点击量:58763 今日访问量:1 总访问量:1865 更新日期:2025-03-01 建议使用谷歌、火狐浏览器 常见问题

版权所有©2020 昆明医科大学第一附属医院 技术支持:重庆聚合科技有限公司 地址:云南省昆明市西昌路295号(650032)