摘要：
目的 进一步研究血管内皮细胞(vascular endothelial cells,VECs)和脂肪干细胞(adipose-derived stromal cells,ADSCs)联合培养对ADSCs成骨分化的影响,为联合培养VECs和ADSCs作为骨组织工程种子细胞的可能性提供实验依据. 方法 分别自足月妊娠SD大鼠和18周龄SD大鼠制备脐血来源的VECs和ADSCs,行形态学观察及免疫荧光染色鉴定.取第3代ADSCs与诱导培养6周的VECs按细胞比例分别为3:1、1:1和1:3设为实验组A、B、C组,.ADSCs、VECs单独培养设为对照组D、E组.培养第7、14天取各组细胞行ALP和饱和茜素红钙染色,进行ALP和骨钙定性检测;第4、7、14天定量测定各组细胞ALP和骨钙素(osteocalcin,OC)含量. 结果 诱导培养6周的脐血来源VECs可见短梭形和多角形细胞混合生长,免疫荧光染色可见血管性血友病因子为阳性.ADSCs培养可见贴壁单个核细胞形态单一,呈梭形生长,无重叠现象;免疫荧光染色可见CD90~+.各组细胞培养第7天,ALP染色示A、D、E组呈阴性反应,B、C组可见部分阳性细胞;第14天时D、E组仍呈阴性反应,A、B、C组可见片状阳性细胞.培养第7天,茜素红染色示各组均未发现红色阳性细胞;第14天时A、B、C组可见极少数阳性细胞,D、E组未发现阳性细胞.各组ALP含量随时间延长均逐渐增高,其中B组各时间点含量均最高,与其余各组比较差异均有统计学意义(P＜0.01),各时间点A、C组与D、E组比较差异均有统计学意义(P＜0.01),A、C组间及D、E组间比较差异无统计学意义(P＞0.05).各组OC含量随时间延长逐渐增高,培养第7、14天时B组含量最高,各时间点B组与其余各组比较差异均有统计学意义(P＜0.01),第4、14天时C、D组间比较差异均有统计学意义(P＜0.01),第14天时A、C组和E组比较差异有统计学意义(P＜0.05),其余各时间点各组间比较差异均无统计学意义(P＞0.05). 结论 大鼠脐血来源的VECs能在体外诱导ADSCs向成骨细胞方向分化,1:1比例分化能力最强.
