摘要：
目的 优化肺癌组织中puma基因第三外显子(GC含量＞80%)PCR扩增的最适实验条件,应用此条件对34例肺癌组织中puma第三外显子进行突变研究,探讨其与肺癌发生发展的相关性.方法 通过改变PCR反应体系各组分的浓度和反应条件,确定puma基因第三外显子PCR扩增体系最适浓度和反应条件.应用优化后的反应体系扩增34例肺癌puma第三外显子,测序寻找突变.结果 PCR反应体系为dNTP 200 μmol/L, 增强体系MgSO4 2.0 mmol/L,引物500 nmol/L,Taq DNA聚合酶0.1 U/μl,模板量不低于4 000 ng,10×增强体系缓冲液5 μl,增强液5 μl,总体积50 μl.反应条件为95℃预变性5 min,95℃ 45 s,64℃ 45 s,72℃ 45 s,循环33次,最后72℃延伸5 min.应用以上最适条件,成功扩增34例肺癌患者puma基因第三外显子,经测序均无突变.结论 肺癌患者puma基因第三外显子突变与肺癌的发生发展及肺癌的病理类型之间无明显相关.
