摘要：
目的构建β分泌酶抑制剂筛选模型用于治疗阿尔采末病药物筛选.方法克隆人β分泌酶基因,并在大肠杆菌中表达,经纯化、复性后获得重组蛋白.以重组β淀粉样肽融合蛋白为底物,体外建立酶学反应.酶切反应液用聚丙烯酰胺凝胶电泳检测,或将其包被金属螯和酶标板,用抗β淀粉样肽抗体行ELISA检测.结果用RT-PCR法克隆了人β分泌酶基因,构建入表达载体,诱导表达后获得高效表达.建立体外酶学反应,用ELISA和SDS-PAGE检测,二者检测结果一致,且用所构建方法测得阳性抑制剂的IC50值与文献报道吻合.对77种用于老年痴呆治疗的中草药提取物进行筛选,仅发现有17种显示微弱的β分泌酶抑制活性.结论成功构建了β分泌酶抑制剂筛选模型并用于中草药提取物活性筛选.
