目的 分析云南省9所三级医院2017—2021年血流感染病原菌的分布及耐药演变特点，为临床合理选用抗菌药物提供可靠依据。方法 采用药敏纸片法或仪器法，对9所不同地区的三级医院按统一技术方案，进行细菌鉴定及药物敏感性试验，按2021年临床实验室标准研究所（Clinical and Laboratory Standards Institute, CLSI）折点标准判断结果，使用WHONET5.6进行数据统计分析。结果 2017—2021年血流感染标本共分离出病原菌12 003株，其中革兰阴性菌7 442株（62.0%），革兰阳性菌4 562株（38.0%），分离株数呈上升趋势；门诊分离出163株（1.4%），住院11 840株（98.6%）；排名前三的革兰阴性菌依次大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌，其中耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌（carbapenem-resistant Klebsiella pneumoniae, CR-KPN）309株（4.2%），耐碳青霉烯类大肠埃希菌29株（0.4%），耐碳青霉烯类阴沟肠杆菌19株（0.3%）,CR-KPN检出数量呈逐年上升的趋势；排名前三的革兰阳性菌依次凝固酶阴性葡萄球菌、金黄色葡萄球菌、屎肠球菌，其中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（methicillin-resistant Staphylococcus aureus, MRSA）检出213株，占27.7%，且由2017年的40.0%下降至2021年的23.4%，呈逐年下降的趋势。未发现对万古霉素耐药的葡萄球菌属及肠球菌属。结论 多中心血流感染病原菌5年检出率及构成变化不大，但各医院检出情况不同。耐碳青霉烯类肠杆菌目细菌检出数逐年增加，应重点关注。