摘要：
目的 以结核杆菌DNA检测为切入点,建立实时荧光PCR定性方法分析灵敏度验证的方法并进行评价.方法 取5个低浓度标本分别平行检测16次,计算每个标本的检出率,分别以浓度的对数(以10为底)、Ct值和检出概率作曲线拟合,得到结核杆菌DNA荧光PCR检出率为50%和95%所对应的浓度及Ct值,并据此建立结果报告策略.以巢式PCR和实时荧光PCR同时检测52例临床标本,评价所建立的结果报告策略的适用性.结果 结核杆菌DNA检出率为50%和95%所对应的浓度分别为69 copy/mL,2.46×103 copy/mL.所建立的结果报告策略为结果大于2.46×103 copy/mL时报告阳性,结果小于2.46×103 copy/mL而大于69 copy/mL时进行复查,如果复查为阳则报告阳性,如果复查结果为阴性时报告为阴性,结果小于69 copy/mL报告为阴性.52例临床标本经检测后,荧光PCR检出6例阳性,巢式PCR检出4例阳性,计算kappa值经u检验(kappa=0.78,u=3.58,P<0.05)表明两种方法报告的结果具有良好的一致性.结论 依据检出概率-浓度曲线制定结核杆菌-DNA荧光PCR定性方法结果报告策略具有较好的临床适用性,依据最低检出限制订结果报告策略可应用于基于定量数据的定性PCR.
