目的：通过体外RNAi干扰技术靶向抑制原癌基因Bmi-1表达，观察其对胆囊癌细胞增殖的效应及对细胞周期的影响。方法：针对Bmi-1不同位点构建4个miRNABmi-1重组质粒，采用RT-PCR和Western blot检测各组Bmi-1 mRNA和蛋白表达，选择干扰效果最明显组质粒转染胆囊癌GBC-SD细胞，48 h后采用BrdU及流式细胞仪检测细胞增殖及细胞周期变化。结果：RT-PCR显示miRNABmi-1重组质粒1、3、4组mRNA表达明显低于对照组（P＜0．05）；Western blot显示miRNABmi-1重组质粒2、3、4组蛋白表达明显低于对照组（P＜0．05）；选取第4组（mRNA及蛋白表达抑制效果最强）质粒转染GBC-SD细胞，BrdU显示mRNA-Bmi-1-4组细胞增殖抑制明显，增殖率为46．63±5．31，明显低于对照组（P＜0．05）；细胞周期显示miRNA-Bmi-1-4组G0/G1期细胞增加（72．20±1．71），G2/M和S期细胞减少（18．30±7．21，9．50±6．01），与对照组比较，差异具有显著性（P＜0．05）。结论：靶向沉默Bmi-1表达，能有效抑制胆囊癌细胞增殖，使细胞周期阻滞于G0/G1期，Bmi-1可能成为胆囊癌基因治疗的有效靶点。