摘要:
目的:研究阿魏酸钠(SF)对体外乙醛诱导的大鼠肝星状细胞(HSC-T6)增殖、活化、胶原合成的影响及其作用机制。方法:体外培养HSC-T6细胞,建立乙醛诱导的HSC-T6增殖模型,设空白组、乙醛组、秋水仙碱组(2.5μmol·L-1)及SF组(1,10,25,50,100,200,400μmol·L-1),通过细胞增殖和毒性检测(MTS)比色法检测细胞增殖,筛选合适的SF浓度。蛋白免疫印迹法(Western blot)检测SF(400,200,100μmol·L-1)对乙醛诱导的HSC-T6细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测Ⅰ型,Ⅲ型胶原浓度,酸水解法检测羟脯氨酸(Hyp)含量,实时荧光定量聚合酶链式反应(Realtime PCR)检测转化生长因子-β1(TGF-β1),信号转导蛋白Smad2,Smad3,Smad4,Smad7,基质金属蛋白酶-1(MMP-1)和金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)基因mRNA表达变化。结果:与空白组比较,200μmol·L-1的乙醛能显著诱导HSC-T6体外增殖(P(0.01);与空白组比较,模型组HSC-T6增殖显著增加(P(0.01),α-SMA和I型,Ⅲ型胶原和Hyp含量显著增加(P(0.01),TGF-β1,Smad2,Smad3,Smad4,Smad7 mRNA的表达显著上调(P(0.01),MMP-1和TIMP-1 mRNA表达显著上调(P(0.01)。与模型组比较,400,200,100μmol·L-1浓度的SF能明显抑制乙醛诱导的HSC-T6增殖(P(0.05,P(0.01),显著降低α-SMA和I型,Ⅲ型胶原和Hyp含量(P(0.01),下调TGF-β1,Smad2,Smad3,Smad4基因mRNA的表达(P(0.05,P(0.01),上调Smad7基因mRNA表达(P(0.01),并明显上调MMP-1 mRNA表达(P(0.05,P(0.01)和下调TIMP-1 mRNA表达(P(0.01)。结论:SF能通过调控TGF-β1/Smad和MMP-1/TIMP-1信号通路,抑制乙醛诱导的体外HSC-T6细胞的增殖,活化和胶原分泌。