目的探讨孕中期胎儿中枢神经系统畸形诊断中实时动态四维彩超联合母体血清叶酸、维生素B12（VB12）检测的应用价值。方法对医院2015年1月～2017年12月接收的100例孕中期可疑胎儿中枢神经系统畸形的母体及胎儿临床资料进行回顾性分析,均接受跟踪随访,均明确胎儿中枢神经系统畸形发生情况。将随访结果作为"金标准",统计胎儿中枢神经系统畸形的情况,了解实时动态四维彩超检查情况,对比发生者和未发生者母体血清叶酸、VB12水平。评价实时动态四维彩超、母体血清叶酸水平、母体血清VB12水平及实时动态四维彩超联合母体血清叶酸、VB12水平对孕中期胎儿中枢神经系统畸形的诊断价值。结果本组受试者中共有22例经随访确诊为胎儿中枢神经系统畸形,发生率为22.00%,共有27例胎儿经实时动态四维彩超检查拟诊断为中枢神经系统畸形;发生者母体血清叶酸、VB12水平均明显低于未发生者母体血清叶酸、VB12水平（P(0.05）;实时动态四维彩超联合母体血清叶酸、VB12诊断孕中期胎儿中枢神经系统发育畸形的AUC、灵敏度、特异度分别为0.926、81.82%、89.74%,均高于单纯实时动态四维彩超、母体血清叶酸水平、母体血清VB12水平诊断。结论孕中期胎儿中枢神经系统畸形者母体血清叶酸、VB12水平均较低,且实时动态四维彩超联合母体血清叶酸、VB12水平在孕中期胎儿中枢神经系统畸形诊断的价值较高。