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收录情况:
◇ 统计源期刊
◇ 北大核心
文章类型:
机构:
[1]昆明医科大学第一附属医院产科
外科科室
妇产科
产科
昆明医科大学附属第一医院
[2]云南省第一人民医院产科
云南省第一人民医院
[3]昆明医科大学第一附属医院医学检验科产前诊断室
医技科室
医学检验科
昆明医科大学附属第一医院
[4]昆明市妇幼保健院医学遗传与产前诊断科
[5]云南省检验医学重点实验室
[6]云南省实验诊断研究所
[7]云南省内设研究机构,昆明650032
出处:
ISSN:
关键词:
HOTAIR
慢病毒载体
HTR-8/Svneo
子痫前期
摘要:
目的 构建稳定过表达HOTAIR的人滋养细胞HTR-8/SVneo细胞系,并验证HOTAIR的表达。方法 利用PCR技术扩增HOTAIR基因全长序列,并将其克隆入LV5载体中,构建LV5-HOTAIR载体,重组质粒经双酶切鉴定及测序验证成功后,转染人胚肾细胞293T,包装过表达病毒颗粒,制备并浓缩慢病毒颗粒。将构建好的过表达HOTAIR慢病毒载体感染HTR-8/SVneo细胞,采用嘌呤霉素筛选出HO-TAIR稳定表达的细胞系,荧光显微镜观察绿色荧光表达;qRT-PCR验证HOTAIR表达。结果 重组质粒酶切得到的条带与预期相符,过表达HOTAIR慢病毒载体中序列与目标序列一致。荧光显微镜下过表达HOTAIR组细胞有绿色荧光表达;qRT-PCR结果表明过表达HOTAIR的HTR-8/Svneo稳定细胞株中HOTAIR表达是Control组的206.3倍(P(0.05),是NC组的232.8倍(P(0.05)。结论 成功建立稳定过表达HOTAIR的HTR-8/SVneo细胞,且过表达HOTAIR的HTR-8/Svneo稳定细胞株中HOTAIRmRNA表达水平明显升高。
基金:
国家自然科学基金(编号:81760273、81360103);云南省科
技计划项目(编号:2017FB107);云南省“万人计划”青年
拔尖人才专项;云南省卫生科技计划项目(编号:
2018NS0112);昆明医科大学研究生创新基金项目(编号:
2019S119)
基金编号:
编号:81760273、81360103
第一作者:
第一作者机构:
[1]昆明医科大学第一附属医院产科
[2]云南省第一人民医院产科
通讯机构:
[1]昆明医科大学第一附属医院产科
[3]昆明医科大学第一附属医院医学检验科产前诊断室
[4]昆明市妇幼保健院医学遗传与产前诊断科
[5]云南省检验医学重点实验室
[6]云南省实验诊断研究所
[7]云南省内设研究机构,昆明650032
推荐引用方式(GB/T 7714):
李晓娟,王珏,何建萍,等.HOTAIR过表达慢病毒载体的构建及稳定细胞株的建立[J].安徽医科大学学报.2021,56(05):683-687.