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HOTAIR过表达慢病毒载体的构建及稳定细胞株的建立

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资源类型:

收录情况: ◇ 统计源期刊 ◇ 北大核心

机构: [1]昆明医科大学第一附属医院产科 [2]云南省第一人民医院产科 [3]昆明医科大学第一附属医院医学检验科产前诊断室 [4]昆明市妇幼保健院医学遗传与产前诊断科 [5]云南省检验医学重点实验室 [6]云南省实验诊断研究所 [7]云南省内设研究机构,昆明650032
出处:
ISSN:

关键词: HOTAIR 慢病毒载体 HTR-8/Svneo 子痫前期

摘要:
目的 构建稳定过表达HOTAIR的人滋养细胞HTR-8/SVneo细胞系,并验证HOTAIR的表达。方法 利用PCR技术扩增HOTAIR基因全长序列,并将其克隆入LV5载体中,构建LV5-HOTAIR载体,重组质粒经双酶切鉴定及测序验证成功后,转染人胚肾细胞293T,包装过表达病毒颗粒,制备并浓缩慢病毒颗粒。将构建好的过表达HOTAIR慢病毒载体感染HTR-8/SVneo细胞,采用嘌呤霉素筛选出HO-TAIR稳定表达的细胞系,荧光显微镜观察绿色荧光表达;qRT-PCR验证HOTAIR表达。结果 重组质粒酶切得到的条带与预期相符,过表达HOTAIR慢病毒载体中序列与目标序列一致。荧光显微镜下过表达HOTAIR组细胞有绿色荧光表达;qRT-PCR结果表明过表达HOTAIR的HTR-8/Svneo稳定细胞株中HOTAIR表达是Control组的206.3倍(P(0.05),是NC组的232.8倍(P(0.05)。结论 成功建立稳定过表达HOTAIR的HTR-8/SVneo细胞,且过表达HOTAIR的HTR-8/Svneo稳定细胞株中HOTAIRmRNA表达水平明显升高。

基金:

基金编号: 编号:81760273、81360103

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第一作者:
第一作者机构: [1]昆明医科大学第一附属医院产科 [2]云南省第一人民医院产科
通讯机构: [1]昆明医科大学第一附属医院产科 [3]昆明医科大学第一附属医院医学检验科产前诊断室 [4]昆明市妇幼保健院医学遗传与产前诊断科 [5]云南省检验医学重点实验室 [6]云南省实验诊断研究所 [7]云南省内设研究机构,昆明650032
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