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文章类型:
机构:
[1]昆明医科大学第一附属医院呼吸与危重症医学二科,昆明650032
呼吸与危重症二科
呼吸内科
内科科室
出处:
ISSN:
关键词:
BMF基因
过表达
敲减
A549稳转细胞株
摘要:
目的:构建Bcl-2修饰因子(BMF)过表达及BMF敲减A549稳转细胞株。方法:本研究为实验研究。根据BMF基因序列设计合成特异性引物并扩增目的基因,将其定向连接至经限制性内切酶BstB Ⅰ/Spe Ⅰ酶切后的GL159载体上,构建GL159-BMF重组质粒,经过筛选和测序鉴定后的阳性克隆转染293T细胞,包装慢病毒并测定病毒滴度。构建BMF-shRNA,连接到Age Ⅰ和EcoR Ⅰ双酶切后的pSLenti-U6-shRNA-CMV-EGFP-F2A-Puro-WPRE载体上,经鉴定后转染293T细胞,包装慢病毒、测定病毒滴度,最终转染至A549细胞内。采用RT-PCR技术检测A549稳转细胞株BMF mRNA的表达情况。结果:重组质粒GL159-BMF及BMF-shRNA在慢病毒的介导下转染至A549细胞内且稳定表达。RT-PCR检测结果表明:BMF过表达组的BMF mRNA表达量显著高于其对照组,差异倍数为986.23±35.47(
P<0.001),BMF敲减组的BMF mRNA表达量显著低于其对照组,差异倍数为0.18±0.06(
P<0.001)。
结论:成功构建BMF过表达及敲减A549细胞株,为后续BMF在慢性阻塞性肺疾病细胞凋亡机制中的研究奠定了基础。
第一作者:
第一作者机构:
[1]昆明医科大学第一附属医院呼吸与危重症医学二科,昆明650032
通讯作者:
推荐引用方式(GB/T 7714):
苏琰迪,李春桃,张雪梅,等.Bcl-2修饰因子过表达及敲减A549稳转细胞株的构建[J].国际呼吸杂志.2023,43(6):670-678.