资源类型:
收录情况:
◇ 统计源期刊
文章类型:
机构:
[1]昆明医科大学第一附属医院耳鼻咽喉头颈外科
外科科室
耳鼻咽喉科
耳鼻喉二科(头颈外科)
昆明医科大学附属第一医院
[2]中山大学附属第七医院耳鼻咽喉科
深圳医学信息中心
中山大学附属第七医院
[3]昆明医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室
[4]中国科学院昆明动物研究所动物模型与人类疾病机理重点实验室
出处:
ISSN:
关键词:
鼻炎
变应性
RNA干扰
GATA-3
T-bet
慢病毒载体
模型
小鼠
摘要:
目的 研究RNAi介导的GATA-3基因慢病毒载体si-GATA-3在体外对变应性鼻炎(allergic rhinitis,AR)小鼠PBMCs中Th2、Th1细胞亚群功能的调节作用。方法 构建RNAi介导的GATA-3基因慢病毒载体siGATA-3,并进行包装、纯化和滴定。BALB/C小鼠随机分为AR组和正常对照组。用卵蛋白构建BALB/C小鼠变应性鼻炎模型,抽取其外周血并分离外周血中单个核细胞(PBMCs),随机分为3组,即si-GATA-3组、siNC组和AR组。进行细胞培养,然后分别用si-GATA-3、si-NC和生理盐水对3组变应性鼻炎小鼠的PBMCs进行干预72 h,用生理盐水代替si-GATA-3干预正常对照组小鼠的PBMCs。干预结束分离PBMCs和细胞培养上清液。分别用荧光定量qPCR和Western bloting方法检测PBMCs中GATA-3 mRNA、T-bet mRNA和GATA-3、T-bet蛋白的相对表达量;用ELISA技术检测细胞培养上清液中IL-4和IFN-γ的含量。结果 构建出RNAi介导的GATA-3基因慢病毒载体si-GATA-3,其滴度为5×108 TU/mL。制备出BALB/C小鼠的AR模型。Si-GATA-3组PBMCs中GATA-3 mRNA、GATA-3蛋白的相对表达量和上清液中IL-4的含量均明显低于AR组和si-NC组的表达量(P <0.01),AR组和si-NC组中3者的表达量均明显高于正常对照组(P <0.01);AR组3者表达量和si-NC组无差异(P> 0.05)。si-GATA-3组PBMCs中T-bet mRNA及其蛋白的相对表达量明显高于AR组和si-NC组的表达量(P <0.01),AR组和si-NC组中二者的表达量均明显低于对照组(P <0.01);AR组的二者表达量和si-NC组无差异(P> 0.05)。但si-GATA-3组细胞培养上清液中IFN-γ的含量高于正常对照组(P <0.05),AR组与si-NC组中IFN-γ明显高于正常对照组和si-GATA-3组(P <0.01);AR组与si-NC组之间IFN-γ的表达,差异无统计学意义(P> 0.05)。结论 si-GATA-3能有效的下调Th2细胞中GATA-3mRNA、GATA-3蛋白和IL-4的表达,并上调Th1细胞中T-bet mRNA和T-bet蛋白的表达,体外能有效地纠正小鼠AR模型中PBMCs中Th2/Th1的免疫失衡。
基金:
国家自然科学基金资助项目(81960185);;云南省科技厅-昆明医科大学应用基础研究联合专项基金资助项目[2018FE001(-205)];
基金编号:
81960185
-205
第一作者:
第一作者机构:
[1]昆明医科大学第一附属医院耳鼻咽喉头颈外科
[2]中山大学附属第七医院耳鼻咽喉科
推荐引用方式(GB/T 7714):
李玉晓,贺铭,王天蓉,等.si-gata-3对ar小鼠pbmcs中th1/th2细胞亚群功能的体外调节[J].昆明医科大学学报.2022,43(08):7-16.