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si-gata-3对ar小鼠pbmcs中th1/th2细胞亚群功能的体外调节

In Vitro Regulation of Th1/Th2 Cell of PBMCs in AR Mice by si-GATA-3

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资源类型:

收录情况: ◇ 统计源期刊

机构: [1]昆明医科大学第一附属医院耳鼻咽喉头颈外科 [2]中山大学附属第七医院耳鼻咽喉科 [3]昆明医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室 [4]中国科学院昆明动物研究所动物模型与人类疾病机理重点实验室
出处:
ISSN:

关键词: 鼻炎 变应性 RNA干扰 GATA-3 T-bet 慢病毒载体 模型 小鼠

摘要:
目的 研究RNAi介导的GATA-3基因慢病毒载体si-GATA-3在体外对变应性鼻炎(allergic rhinitis,AR)小鼠PBMCs中Th2、Th1细胞亚群功能的调节作用。方法 构建RNAi介导的GATA-3基因慢病毒载体siGATA-3,并进行包装、纯化和滴定。BALB/C小鼠随机分为AR组和正常对照组。用卵蛋白构建BALB/C小鼠变应性鼻炎模型,抽取其外周血并分离外周血中单个核细胞(PBMCs),随机分为3组,即si-GATA-3组、siNC组和AR组。进行细胞培养,然后分别用si-GATA-3、si-NC和生理盐水对3组变应性鼻炎小鼠的PBMCs进行干预72 h,用生理盐水代替si-GATA-3干预正常对照组小鼠的PBMCs。干预结束分离PBMCs和细胞培养上清液。分别用荧光定量qPCR和Western bloting方法检测PBMCs中GATA-3 mRNA、T-bet mRNA和GATA-3、T-bet蛋白的相对表达量;用ELISA技术检测细胞培养上清液中IL-4和IFN-γ的含量。结果 构建出RNAi介导的GATA-3基因慢病毒载体si-GATA-3,其滴度为5×108 TU/mL。制备出BALB/C小鼠的AR模型。Si-GATA-3组PBMCs中GATA-3 mRNA、GATA-3蛋白的相对表达量和上清液中IL-4的含量均明显低于AR组和si-NC组的表达量(P <0.01),AR组和si-NC组中3者的表达量均明显高于正常对照组(P <0.01);AR组3者表达量和si-NC组无差异(P> 0.05)。si-GATA-3组PBMCs中T-bet mRNA及其蛋白的相对表达量明显高于AR组和si-NC组的表达量(P <0.01),AR组和si-NC组中二者的表达量均明显低于对照组(P <0.01);AR组的二者表达量和si-NC组无差异(P> 0.05)。但si-GATA-3组细胞培养上清液中IFN-γ的含量高于正常对照组(P <0.05),AR组与si-NC组中IFN-γ明显高于正常对照组和si-GATA-3组(P <0.01);AR组与si-NC组之间IFN-γ的表达,差异无统计学意义(P> 0.05)。结论 si-GATA-3能有效的下调Th2细胞中GATA-3mRNA、GATA-3蛋白和IL-4的表达,并上调Th1细胞中T-bet mRNA和T-bet蛋白的表达,体外能有效地纠正小鼠AR模型中PBMCs中Th2/Th1的免疫失衡。

基金:

基金编号: 81960185 -205

语种:
第一作者:
第一作者机构: [1]昆明医科大学第一附属医院耳鼻咽喉头颈外科 [2]中山大学附属第七医院耳鼻咽喉科
推荐引用方式(GB/T 7714):

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