目的 探讨2017-2021年云南省中部和西部地区多家三级综合医院尿标本中分离病原菌的分布和耐药情况，为临床初期经验性用药提供依据。方法 分析2017-2021云南多家三级综合医院尿标本中检出的同一患者非重复细菌，采用纸片扩散法或自动仪器法进行药敏检测，按照美国临床和实验室标准协会（CLSI）2021年标准进行判读，使用WHONET5.6软件对数据进行统计分析。结果 共检测出细菌27 495株，革兰阴性菌20 955株占76.2%,革兰阳性菌6 540株（占23.8%）;女性标本16 966株（占61.7%）,男性标本10 529株（占38.3%）;＞65岁的标本11 159株（占40.6%）,＞18～65岁的标本15 295株（占55.6%）,≤18岁的标本1 041株（占3.8%）;排前五位分别为大肠埃希菌（51.4%）、屎肠球菌（9.5%）、肺炎克雷伯菌（7.8%）、粪肠球菌（6.4%）、铜绿假单胞菌（3.0%）。其中大肠埃希菌对替加环素、碳青霉烯类、阿米卡星、呋喃妥因、哌拉西林/他唑巴坦、磷霉素的耐药率＜5%;对青霉素类、第一、二、三代头孢菌素、喹诺酮类有较高的耐药水平在49.2%～100.0%;肺炎克雷伯菌对替加环素的耐药水平较低在0.0%～8.4%,对碳青霉烯类、阿米卡星耐药率介于5.8%～26.2%;铜绿假单胞菌对抗菌药物的耐药性均高于30.0%。屎肠球菌和粪肠球菌对万古霉素、利奈唑胺、替考拉宁、替加环素的耐药率＜5.0%;粪肠球菌对磷霉素、呋喃妥因、氨苄西林、青霉素G的耐药率＜10.0%。结论 尿标本病原菌多样，早期经验性治疗的同时，应尽快根据培养鉴定及药敏结果针对性用药，从而提高治疗效果和减缓耐药性的产生和传播。