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收录情况：
◇ 统计源期刊
◇ 北大核心
文章类型：
机构：
[1]昆明医科大学基础医学院生物化学与分子生物系, 昆明,650500
[2]昆明医科大学第一附属医院器官移植科, 昆明,650032
外科科室
器官移植中心
昆明医科大学附属第一医院
[3]昆明医科大学第一附属医院病理科, 昆明,650032
医技科室
病理科
昆明医科大学附属第一医院
出处：
ISSN：
关键词：
G6PD
肾透明细胞癌
稳定细胞株
摘要：
目的 肾透明细胞癌(ccRCC)是一种代谢性疾病,葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)与ccRCC的发生发展及患者的不良预后呈正相关.文章首次构建了G6PD缺陷型ccRCC稳定细胞株,检测其迁移表型.方法 OligoEngine RNAi设计针对人G6PD基因3′端非编码区的siRNA及无关siRNA序列,合成双链后通过BglⅡ和HindⅢ酶切位点插入pSP-GFP/Neo表达载体,构建Caki-1-G6PD siRNA细胞株及Caki-1-Negative control细胞株,进而转染并经G418筛选.应用Real-time RT-PCR、Western blot及酶活性方法,检测细胞株的G6PD表达和酶活性;Transwell方法检测细胞迁移表型、Western blot检测p-STAT3/STAT3表达.结果 荧光显微镜下可见Caki-1-G6PD siRNA细胞与Caki-1-Negative control细胞形态良好,通过GFP表达量计算细胞转染效率约为45％～55％;48 h后细胞贴壁密度达90％,荧光表达略有增强,转染效率可达60％.光镜和荧光显微镜下亦可见细胞状态良好,GFP阳性率达95％.与Caki-1-Negative control细胞相比,Caki-1-G6PD siRNA细胞的G6PD mRNA表达量蛋白表达量和酶活性均显著降低(P<0.05).与Caki-1-Negative control细胞相比,Caki-1-G6PD siRNA迁移细胞的相对数量明显降低[(64.0±4.2)个vs(30.0±2.9)个,P<0.01],p-STAT3/STAT3值亦明显下降[(0.45±0.05)vs(0.24±0.01),P<0.01].结论 文章首次成功构建了G6PD稳定敲低和迁移能力低下的Caki-1细胞系,其G6PD敲低所致ccRCC细胞迁移能力降低与STAT3信号相关.
基金：
国家自然科学基金(81760455, 81160246, 81460421, 31660246)%云南省科技计划项目[2017FE468(-003)%2018FE468(-001)%2017FE 468(-132) , 2017FE468(-141) ]%云南省教育厅科学研究基金项目(2015Y178)
第一作者：
第一作者机构：
[1]昆明医科大学基础医学院生物化学与分子生物系, 昆明,650500
通讯作者：
推荐引用方式(GB/T 7714)：
白宏刚,张巧,况应敏,等.葡萄糖-6-磷酸脱氢酶稳定敲低对肾透明细胞癌细胞迁移的抑制作用[J].医学研究生学报.2018,31(07):697-702.
