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文章类型：
机构：
[1]华中科技大学附属协和医院神经外科 武汉 430022
华中科技大学同济医学院附属协和医院
[2]昆明医学院第一附属医院神经外科
外科科室
神经外科
昆明医科大学附属第一医院
[3]中日友好医院神经外科
出处：
ISSN：
关键词：
神经生长因子
质粒
脊髓
神经干细胞
基因表达
摘要：
目的 构建人NGF-β基因真核表达载体并观察其在子鼠脊髓神经干细胞内的表达.方法 应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)从人脑肿瘤旁组织总RNA中扩增出750 bp片段,将其克隆至真核表达载体pcDNA3中经酶切鉴定产生750 bp和5.2 kd)的片段,完成序列分析.分离培养E14子鼠脊髓神经干细胞,以非脂质体转染试剂FuGENE HD介导质粒peDNA3-hNGFb转染培养第3代的细胞,应用免疫细胞化学和Western blot鉴定NGF-β在细胞内的表达.结果 RT-PCR产物为750 bp的片段,重组质粒peDNA3-hNGFb经双酶切产生750 bp和5.2kd)的片段,测序结果与文献报道结果完全一致.免疫细胞化学、Western blot结果表明NGF-β能在细胞中正确表达.结论 成功构建了peDNA3-hNGFb真核表达载体,其转染的子鼠脊髓神经干细胞能正确表达NGF-β.
基金：
教育部留学回国人员科研启动基金(教外司留[2002]247号)
第一作者：
第一作者机构：
[1]华中科技大学附属协和医院神经外科 武汉 430022
通讯作者：
推荐引用方式(GB/T 7714)：
雷德强,赵洪洋,刘如恩,等.人β神经生长因子基因真核表达载体的构建与表达[J].中华实验外科杂志.2008,25(8):993-995.
