摘要:
目的克隆大鼠脑组织中神经生长因子(NGF)β亚基前体的全长序列,构建其真核表达载体pEGFP-NGF.方法采用RT-PCR方法扩增NGFβ亚基前体的全长序列,克隆入载体pMD 18-T,转化大肠杆菌JM109,挑选白色菌落行酶切鉴定、PCR鉴定及序列分析;利用高保真Taq酶自重组质粒pMD 18-T/NGF中扩增目的基因NGF,将目的基因与真核表达载体pEGFP-N1行双酶切,T4连接酶连接,转化大肠杆菌DH-5α,挑选白色菌落行酶切鉴定.结果pMD 18-T/NGF测序结果与GenBank的序列完全一致,pEGFP-NGF行限制性内切酶HindⅢ、BamHⅠ酶切,可见酶切片断与插入基因长度相符.结论成功从大鼠脑组织中克隆神经生长因子(NGF)β亚基前体的全长序列,并构建其真核表达载体pEGFP-NGF,为从分子水平开展NGF转基因相关研究奠定了基础.