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大鼠β神经生长因子前体基因的克隆及其真核表达载体pEGFP-NGF的构建

Cloning the Gene of Rat Premature Nerve Growth Factor and Constructing Its Eukaryotic Expression Vector pEGFP-NGF

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文献详情

资源类型：
作者：
丁鹏[1] ; 冯忠堂[1] ; 王廷华[1] ; 董坚[3] ; 杨志敏[3] ; 路华[1] ; 路钢[1] ;
机构： [1]昆明医学院神经科学研究所 昆明 650031 [2]昆明医学院第一附属医院中心实验室 [3]昆明医学院第一附属医院神经外科
出处：
DOI： 10.3969/j.issn.1672-173X.2004.06.004
ISSN：

关键词： 神经生长因子 T-A克隆 真核表达载体

摘要：
目的克隆大鼠脑组织中神经生长因子(NGF)β亚基前体的全长序列,构建其真核表达载体pEGFP-NGF.方法采用RT-PCR方法扩增NGFβ亚基前体的全长序列,克隆入载体pMD 18-T,转化大肠杆菌JM109,挑选白色菌落行酶切鉴定、PCR鉴定及序列分析;利用高保真Taq酶自重组质粒pMD 18-T/NGF中扩增目的基因NGF,将目的基因与真核表达载体pEGFP-N1行双酶切,T4连接酶连接,转化大肠杆菌DH-5α,挑选白色菌落行酶切鉴定.结果pMD 18-T/NGF测序结果与GenBank的序列完全一致,pEGFP-NGF行限制性内切酶HindⅢ、BamHⅠ酶切,可见酶切片断与插入基因长度相符.结论成功从大鼠脑组织中克隆神经生长因子(NGF)β亚基前体的全长序列,并构建其真核表达载体pEGFP-NGF,为从分子水平开展NGF转基因相关研究奠定了基础.

基金：
国家自然科学基金(30260112)
语种：
中文
第一作者：
第一作者机构： [1]昆明医学院神经科学研究所 昆明 650031
通讯作者：
推荐引用方式(GB/T 7714)：
丁鹏,冯忠堂,王廷华,等.大鼠β神经生长因子前体基因的克隆及其真核表达载体pEGFP-NGF的构建[J].四川大学学报（医学版）.2004,35(6):761-763.

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