摘要：
目的 构建人神经生长因子β(NGF-β)基因真核表达载体并观察其在L929细胞内的表达.方法 以RT-PCR从人脑组织总RNA中扩增NGF-β cDNA,将其克隆到真核表达载体pcDNA3中,经酶切鉴定和序列分析后,以Lipofectamine2000介导转染L929细胞,应用免疫细胞化学和western blot鉴定NGF-β在细胞内的表达.结果 RT-PCR产物为750bp的特异片段,重组质粒pcDNA3-hNGFb酶切后产生750bp和5.2kb的片段,DNA测序证实750bp片段的碱基序列与人NGF-β cDNA完全一致.将其转染L929细胞后,免疫细胞化学、western blot结果表明NGF-β及其前体proNGF-β能在真核细胞中正确表达.结论 成功构建了重组真核表达质粒pcDNA3-hNGFb,为后续的研究奠定基础.
