摘要：
目的:构建云南个旧肺鳞癌YTMLC-90细胞株的cDNA文库.方法:从培养的人肺鳞癌YTMLC-90细胞株中提取总RNA,利用经修饰的oligo(dT)引物(含SfiⅠ B酶切位点)合成cDNA第1链.同时,根据真核生物mRNA 5′端帽子结构的特点,利用SMART核苷酸(含SfiⅠ A酶切位点)作为cDNA第1链在mRNA 5′端延伸出去的模板.以此序列为引物,利用LD-PCR(long-distance PCR)合成双链cDNA.双链cDNA经SfiⅠ(Ⅰ A和Ⅰ B)酶切和过柱分级分离后,克隆入经SfiⅠ酶切的载体λTripIE×2,经体外包装即为cDNA文库.结果:人肺癌细胞株YTMLC-90的cDNA文库中,含有1.01×109pfu/L个重组子,重组率为93.2%.将该文库扩增后,克隆数可达5.24×1012pfu/L,插入cDNA的长度为750～3 000 bp.结论:所构建的cDNA文库具有较好的质量,为进一步筛选、克隆肺癌特异性表达基因奠定了基础.
