资源类型：
收录情况：
◇ 北大核心
文章类型：
机构：
[1]昆明医学院第一附属医院临床医学实验研究中心,云南,昆明,650032
昆明医科大学附属第一医院
出处：
ISSN：
关键词：
肺癌
cDNA文库
构建
鉴定
摘要：
目的:构建云南个旧肺鳞癌YTMLC-90细胞株的cDNA文库.方法:从培养的人肺鳞癌YTMLC-90细胞株中提取总RNA,利用经修饰的oligo(dT)引物(含SfiⅠ B酶切位点)合成cDNA第1链.同时,根据真核生物mRNA 5′端帽子结构的特点,利用SMART核苷酸(含SfiⅠ A酶切位点)作为cDNA第1链在mRNA 5′端延伸出去的模板.以此序列为引物,利用LD-PCR(long-distance PCR)合成双链cDNA.双链cDNA经SfiⅠ(Ⅰ A和Ⅰ B)酶切和过柱分级分离后,克隆入经SfiⅠ酶切的载体λTripIE×2,经体外包装即为cDNA文库.结果:人肺癌细胞株YTMLC-90的cDNA文库中,含有1.01×109pfu/L个重组子,重组率为93.2%.将该文库扩增后,克隆数可达5.24×1012pfu/L,插入cDNA的长度为750～3 000 bp.结论:所构建的cDNA文库具有较好的质量,为进一步筛选、克隆肺癌特异性表达基因奠定了基础.
第一作者：
第一作者机构：
[1]昆明医学院第一附属医院临床医学实验研究中心,云南,昆明,650032
通讯作者：
推荐引用方式(GB/T 7714)：
李海红,马丽菊,王秦秦.云南个旧肺鳞癌YTMLC-90细胞株cDNA文库构建和鉴定[J].Xi bao yu fen zi mian yi xue za zhi = Chinese journal of cellular and molecular immunology.2004,20(4):
