目的建立快速、准确检测大鼠脑组织中[d-丙氨酸2,d-亮氨酸5]脑啡肽（DADLE）的液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）定量检测方法。方法 SD大鼠脑组织样品匀浆,乙腈沉淀蛋白,C18反相色谱柱（2.0 mm×50 mm,5μm）以水-甲醇（0.1%甲酸）体系为流动相,室温下,流速0.4 mL·min-1,经LC-MS/MS系统进行定量分析。全脑缺血-再灌注模型大鼠分别单次颈静脉注射DADLE 2,5,10 mg·kg-1后,于10,20 min测定脑组织中DADLE浓度。结果 SD大鼠脑组织匀浆液质量浓度在0.1～1000 ng·mL-1线性关系良好,定量下限为0.1 ng·mL-1,批内、批间精密度RSD(11.6%,准确度范围95.81%～99.19%。缺血-再灌注大鼠给药后10 min脑组织DADLE浓度差异不显著,不同剂量给药后20 min脑组织浓度分别为（1.3±0.45）,（2.2±1.1）,（2.9±1.4） ng·mL-1。结论该分析方法快速、简单,成功应用于DADLE脑组织样品检测。